Investigadores austriacos han desarrollado con éxito un nuevo método electroforético para detectar MIRCERA® y otras eritropoyetinas (EPO) en la sangre. La técnica, que utiliza SARCOSYL-PAGE, ha mejorado específicamente la sensibilidad para MIRCERA, pero no altera las características de rendimiento de SDS-PAGE para detectar otras EPO. Los detalles de este estudio, financiado con una subvención de la Agencia Mundial Antidopaje (AMA), aparecen en el último número de Pruebas y Análisis de Drogas publicado por Wiley-Blackwell.
MIRCERA (metoxipolietilenglicol-epoetina beta), una EPO PEGilada, es una proteína sintética que ayuda al cuerpo a producir glóbulos rojos y se usa para tratar la anemia causada por la enfermedad renal. El medicamento es fabricado por Hoffmann-La Roche y solo está disponible fuera de los EE. UU. debido a una infracción de las patentes de Amgen sobre productos y procesos de EPO recombinante. En el pasado, los atletas han usado las EPO de forma no autorizada como agentes dopantes para mejorar la resistencia en deportes como el ciclismo, las carreras de larga distancia y el remo. La AMA ha prohibido el uso de EPO, como MIRCERA, en todos los deportes competitivos.
"La detección del dopaje con EPO recombinantes es uno de los temas más desafiantes en el control antidopaje", dijo el Dr. Christian Reichel de los Laboratorios Seibersdorf del Instituto Austriaco de Tecnología (AIT) y autor principal del estudiar. El Dr. Reichel y sus colegas obtuvieron muestras de sangre de cuatro voluntarios sanos como parte del estudio. Cada participante recibió una dosis única de cada fármaco EPO (NeoRecormon (66 UI/kg), Dynepo (35 UI/kg) y MIRCERA (50 @g)). Las muestras se recogieron durante al menos 14 días (NeoRecormon, Dynepo) o hasta 42 días después de la inyección en el caso de MIRCERA.
Los investigadores utilizaron una dilución en serie doble de Dynepo (0,09 ng a 0,7 pg), NESP (0,07 ng a 0,5 pg) y MIRCERA (0,4 ng a 3,0 pg para comparar la sensibilidad de SDS-PAGE (sodio electroforesis en gel de dodecilsulfato-poliacrilamida) para detectar MIRCERA mediante transferencia Western. La intensidad de las bandas de Dynepo y NESP disminuyó gradualmente de acuerdo con la disminución de su concentración, pero no se observó un comportamiento similar para las bandas de MIRCERA. "Supusimos a partir de los experimentos que el desempeño alterado de la transferencia Western de MIRCERA se debió a su PEGilación (tratamiento con polietilenglicol para obtener un efecto de acción prolongada de la proteína), " señaló el Dr. Reichel.
A continuación, se separaron PEG de diferentes masas moleculares medias (PEG 1500, 2000, 8000, 20000, 35000) en SDS-PAGE y se visualizaron con un método de tinción específico de PEG. Debido a un poder de solubilización limitado de SDS, se descubrió que los PEG, independientemente del tamaño molecular, migraban como bandas anchas y difusas en SDS-PAGE. Dados los resultados, los investigadores plantearon la hipótesis de que la menor sensibilidad de MIRCERA en las transferencias Western se debía a un problema de solubilidad basado en SDS de la parte PEG de MIRCERA.
Para resolver el problema, las investigaciones primero usaron un detergente con mayor poder solubilizante para PEG que SDS que no mejoró la forma de la banda de MIRCERA. Luego, los investigadores utilizaron SARCOSYL o (SAR)-PAGE con excelentes resultados en transferencias Western al resolver MIRCERA en una banda nítida y al mismo tiempo mantener la resolución de rhEPO y uhEPO en el nivel de rendimiento de SDS-PAGE. Los autores encontraron que "SARCOSYL no se unía al polietilenglicol y, por lo tanto, dejaba los PEG en su estado original sin carga". El rediseño de SDS-PAGE mediante el intercambio de SDS por SARCOSYL en la muestra y la ejecución de búferes resolvió el problema.
"En el pasado, se necesitaban cuatro métodos para detectar sustancias prohibidas. Nuestro método permite a los investigadores detectar MIRCERA y otras EPO con un solo método", confirmó el Dr. Reichel.
